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原代细胞传代技术
点击次数:93 发布时间:2019-03-25

一、贴壁细胞的消化法传代

1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。

2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或与EDTA混合液)轻轻摇动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时,弃去消化液,加入培养液终止消化。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中继续培养。第二天观察贴壁生长情况。

二、悬浮细胞的传代

1、直接传代

① 让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3。

② 用吸管吹打形成细胞悬液后,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。

2、离心法传代

① 将细胞连同培养液一并转移到离心管内,离心800-1000rpm,5分钟。

② 去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液。

③ 将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。

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