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慢病毒感染细胞常见问题解答FAQ
点击次数:255 发布时间:2019-02-15


Q:慢病毒如何稀释?
A:用常规培养基、生理盐水、Hanks液、PBS液等将慢病毒稀释到需要的滴度。如原病毒标记滴度为5 x 108 TU/ml,则取20 µl病毒液加入到80 µl的常规培养基中,即可得到1 x 108 TU/ml的病毒稀释液。
 
Q:A感染液有什么成分,怎么用?
A:HitransG A病毒感染增强液是一种新型的高分子非离子表面活性剂,同时也是一种细胞保护剂和促进吸收剂。它可以通过提高细胞表面活性,大大增加病毒与细胞的接触面积,促进病毒感染细胞。该试剂可显著提高细胞感染效率,且对细胞毒性极低,适合敏感细胞使用。当使用常规培养基感染效果不佳时,可以在培养基中加入A感染液,工作浓度为1X。
 
Q:P感染液有什么作用?如何使用?

A:HitransG P病毒感染增强液是一种阳离子聚合物,通过抑制细胞膜与病毒之间的电荷排斥,增加慢病毒对细胞的感染效率。本产品可以极大提高细胞感染效率,且细胞毒性显著低于Polybrene。当使用常规培养基感染效果不佳时,可以在培养基中加入P感染液,工作浓度为1X。
 
Q:如何确定向细胞中加入慢病毒的jia时间?
A:慢病毒感染细胞后需要4天的时间才能观察到慢病毒携带的基因表达,应在细胞汇合度20~40%时且细胞状态良好时加入慢病毒,确保在感染后4天时细胞增长达到90%~100%的汇合度。
 
Q:加入慢病毒病毒后,细胞死亡很厉害,该如何处理?
A:这种情况是由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用,需要调整并降低感染的MOI值,并且在感染后4小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察,若发现细胞状态变差时,则需要立刻对细胞进行换液操作,使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。
 
Q:如何提高慢病毒对细胞的感染效率?
A:慢病毒对细胞的感染效率受多个因素影响,如细胞自身生长的状态,细胞数量,细胞被慢病毒感染的难易程度等。因此保证细胞正常增殖,轮廓清晰,合适的细胞密度,选择you的感染条件可以更好的保证感染效率。对于悬浮细胞,可采用离心感染方法,减少病毒感染时的体积,从而提高感染效率。如将细胞培养板密封后,用平角转子离心机1000g离心1h,再放回培养箱中正常培养。

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